沙門氏菌生長曲線的測定、來源及分離純化
據世界衛生組織介紹，沙門氏菌廣泛存在于家養和野生動物中，常通過受污染的食物感染人類。人感染后可能出現發熱、腹瀉、嘔吐、腹痛等癥狀，通常持續2至7天。大部分感染者無需特殊治療即可自愈，但兒童和老年人等特殊群體可能出現重癥甚至死亡病例。想要研究沙門氏菌，就得先了解其生長特性，下面分享沙門氏菌生長曲線的測定步驟。
沙門氏菌生長曲線的測定：
將-80℃保存的沙門氏菌甘油凍存液，按1︰100的比例接種到5mLLB液體培養基中，37℃、200rpm/min條件下培養至菌液OD600值為0.6左右。配制兩瓶100mL無菌的LB培養基，按1︰100的比例將OD600值為0.6左右的種子菌液無菌接種到100mLLB培養基中，其中一瓶不接種，作為陰性對照組。于37℃、200rpm/min的恒溫搖床中培養，分別于培養的0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h取出1mL菌液，在96孔板中每孔加入200μL菌液，每個時間點設置3個復孔，在酶標儀中檢測OD600值，制作沙門氏菌的生長曲線。選取沙門氏菌處在穩定生長期的初期階段，進行沙門氏菌來源OMVs的分離純化。
沙門氏菌來源OMVs的分離純化：
按1︰100的比例，將100μL沙門氏菌甘油凍存液接種到10mL無菌LB培養基中，于37℃、200rpm/min條件下培養至菌液OD600值為0.6左右。將上述250μL沙門氏菌種子液無菌接種到含有250mL LB培養基的1L培養瓶中(接種兩瓶)，于37℃、200rpm/min的恒溫搖床中培養至穩定生長期的初期階段。收集處于穩定生長期初期階段的沙門氏菌培養液500mL，在4℃，15000g條件下離心20min去除細菌后取上清液，將上清液過0.45μm濾膜去除雜質后收集上清液，將收集的上清液過0.22μm濾膜后收集上清，將上清經100kD濾膜進行超濾處理，去除蛋白質等大分子雜質，用200μL無菌PBS溶液溶解沉淀物，得到沙門氏菌來源OMVs的濃縮液。