復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌的抑制作用
復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油以蒼術(shù)、艾葉、降香、白術(shù)、白芷、石菖蒲等富含揮發(fā)油成分的中藥材為原料提取制得，可用于制備一種中藥香薰液。中藥煙熏是我國(guó)傳統(tǒng)的防疫手段之一，可用于醫(yī)院等人員密集場(chǎng)所的空氣消毒，還可緩解患者焦慮和疼痛等癥狀。選用蒼術(shù)、艾葉等制成的香薰油對(duì)金黃色葡萄球菌等有明顯的體外抑菌作用，能有效保護(hù)小鼠上呼吸道黏膜及黏膜免疫功能，且對(duì)呼吸道黏膜無(wú)刺激作用。目前，揮發(fā)油的提取方法有水蒸氣蒸餾法、溶劑提取法、輔助萃取法等，水蒸氣蒸餾法是目前實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)上應(yīng)用最普遍的方法，其技術(shù)成熟，操作方式簡(jiǎn)單。本研究用水蒸氣蒸餾法從中藥復(fù)方中提取揮發(fā)油，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)分析不同加水量、浸泡時(shí)間和提取時(shí)間下復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油的提取率，并采用正交試驗(yàn)對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，以期提高揮發(fā)油提取率，并對(duì)復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油的抑菌活性進(jìn)行初步研究，為其工業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用提供參考。
復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油體外抑菌活性試驗(yàn)
菌懸液的制備
將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌活化，接種于LB培養(yǎng)基，將白色念珠菌活化，接種在SDA培養(yǎng)基中，在36℃條件下培養(yǎng)24 h。取各供試菌的菌懸液，用無(wú)菌蒸餾水稀釋至合適倍數(shù)，用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌液濃度，使菌液濃度為1×107-5×107CFU/mL。
對(duì)菌體生長(zhǎng)曲線的影響
用分光光度計(jì)測(cè)定菌懸液的吸光度（OD)，根據(jù)吸光度的數(shù)值判斷菌液濃度。在菌懸液中加入復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油制成揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的培養(yǎng)基；在菌懸液中加入阿莫西林或酮康唑使其濃度為50μg/mL，作為陽(yáng)性對(duì)照組；以菌懸液為陰性對(duì)照組。將以上培養(yǎng)基置于37℃、130 r/min的搖床中培養(yǎng)12 h，每小時(shí)取樣1次，于600 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制供試菌體的生長(zhǎng)曲線。
大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌陰性對(duì)照組的生長(zhǎng)曲線在培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后吸光度會(huì)顯著增加，8～9 h后吸光度趨于平穩(wěn)；而在揮發(fā)油或阿莫西林的作用下，大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)曲線非常平緩，12 h反應(yīng)結(jié)束時(shí)與其初始狀態(tài)下的吸光度基本一致，即菌懸液中加入復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油后大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌無(wú)明顯增殖，復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)有抑制作用。
下圖所示為復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)白色念珠菌生長(zhǎng)曲線的影響，陰性對(duì)照組的含菌量在3 h后逐漸增加，用復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油處理后的樣品溶液含菌量也呈增加趨勢(shì)，但其吸光度值低于陰性對(duì)照組，而經(jīng)酮康唑處理的陽(yáng)性對(duì)照組生長(zhǎng)曲線較平緩，說(shuō)明復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)白色念珠菌有一定的抑制作用，但其作用較弱。
圖復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)白色念珠菌生長(zhǎng)曲線的影響
結(jié)論
預(yù)實(shí)驗(yàn)中初步考察了提取溫度（100℃、105℃、110℃）對(duì)揮發(fā)油提取率的影響，溫度升高，揮發(fā)油提取率略有升高，綜合考慮到操作的經(jīng)濟(jì)性，選擇提取溫度為105℃，但未作進(jìn)一步考察。
提取工藝研究以復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油提取率為參考指標(biāo)，首先采用單因素試驗(yàn)考察加水量、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間對(duì)水蒸氣蒸餾法中復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油提取率的影響。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化了復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油的提取工藝參數(shù)，確定最優(yōu)工藝條件為加10倍量的水，浸泡30 min，回流提取6 h，在此條件下，復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油提取率平均值為0.654%。根據(jù)生長(zhǎng)曲線結(jié)果可知3種供試菌的生長(zhǎng)曲線經(jīng)復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油處理后均有改變，且處理后大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的吸光度值基本不變，說(shuō)明復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油可以抑制3種供試菌的生長(zhǎng)繁殖，且對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的影響明顯優(yōu)于白色念珠菌。該研究結(jié)果可為復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油的工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)，為復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油的臨床應(yīng)用等研究提供參考，但復(fù)方蒼術(shù)揮發(fā)油成分復(fù)雜、水溶性差、易氧化，其成分分析、活性及制劑等還有待進(jìn)一步研究。
相關(guān)新聞推薦
1、五種常用抗真菌藥物對(duì)198株白色念珠菌最低抑菌濃度【藥敏試驗(yàn)】
2、拮抗菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定、鑒定及對(duì)煙草赤星病室內(nèi)防治效果（一）
3、生活飲用水菌落總數(shù)測(cè)定方法及影響因素（一）