復(fù)方大果木姜子軟膠囊對(duì)腫瘤細(xì)胞Hep-2生長(zhǎng)曲線的影響
研究復(fù)方大果木姜子軟膠囊對(duì)腫瘤細(xì)胞Hep-2的拮抗作用。方法臺(tái)盼藍(lán)染色法及生長(zhǎng)曲線法。結(jié)果通過觀察藥物作用于細(xì)胞后對(duì)其正常生長(zhǎng)曲線的影響,發(fā)現(xiàn)藥物作用于Hep-2細(xì)胞后,明顯延長(zhǎng)細(xì)胞正常生長(zhǎng)的倍增時(shí)(TD2=3.245)從而抑制Hep-2的正常生長(zhǎng)。結(jié)論復(fù)方大果木姜子軟膠囊對(duì)腫瘤細(xì)胞Hep-2的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。
實(shí)驗(yàn)過程
取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hep-2,用含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基配制為1×104/ml的細(xì)胞懸液,在25 ml培養(yǎng)瓶中接種5 ml,共接種21瓶,分為正常組、藥物組與陽(yáng)性對(duì)照組(每組7瓶),分別加入終濃度為EC50的受試藥物與對(duì)照藥物,在給藥2 h,1、2、3、4、5、7 d時(shí)分別取樣40μl(取樣時(shí)先用2.5%的胰蛋白酶將貼壁細(xì)胞充分消化),加入0.4%的臺(tái)盼藍(lán)試劑10μl染色后,在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),以每天細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的對(duì)數(shù)為縱軸,以時(shí)間為橫軸繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,對(duì)比觀察藥物對(duì)各實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,結(jié)果見表2及繪制的各實(shí)驗(yàn)組在不同實(shí)驗(yàn)條件下的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制曲線圖,見圖1。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
依據(jù)藥物作用于細(xì)胞倍增時(shí)(TD)公式：TD=0.301 t/(logNtlogNo)(t：培養(yǎng)時(shí)間,No：首次記下的細(xì)胞數(shù),Nt：t時(shí)間后的細(xì)胞數(shù))可以求得：空白組TD1=1.081；藥物組TD2=3.245；對(duì)照組TD3=2.361。
通過上述數(shù)據(jù)分析可知：與空白組細(xì)胞正常倍增時(shí)(TD1=1.081)比較,復(fù)方組作用于Hep-2細(xì)胞后可以明顯的延長(zhǎng)細(xì)胞的倍增時(shí)(TD2=3.245),且作用強(qiáng)于對(duì)照組(TD3=2.361)；同時(shí),結(jié)果表明,復(fù)方對(duì)Hep-2細(xì)胞的抑制作用是通過影響Hep-2細(xì)胞的正常生長(zhǎng)周期而發(fā)揮作用。
藥物對(duì)Hep-2細(xì)胞生長(zhǎng)飽和密度的影響(NS)：從細(xì)胞生長(zhǎng)抑制圖中可以看出,藥物作用于Hep-2細(xì)胞后,明顯影響其正常生長(zhǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)飽和密度顯著降低,與正常組細(xì)胞比較,細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)大坪期的時(shí)間與細(xì)胞數(shù)目顯著降低,但作用與喜樹堿相比略差。
結(jié)論：本研究以Hep-2細(xì)胞株為篩選模型,采用體外抑制腫瘤增殖的方法,對(duì)復(fù)方大果木姜子軟膠囊的藥物有效部位采用臺(tái)盼藍(lán)染色法結(jié)合細(xì)胞生長(zhǎng)曲線繪制從而直觀的表明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)Hep-2的生長(zhǎng)抑制作用。
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