血清對獸用疫苗細胞生長情況的影響
隨著社會進步、經濟發(fā)展水平的提高以及人類生活質量的不斷改善，人們對含蛋白質和脂肪較多的肉類的需求明顯增多，帶動了肉類消費的快速增長。在中國社會這一現(xiàn)象更加明顯，根據(jù)聯(lián)合國商品貿易統(tǒng)計數(shù)據(jù)庫（UN Comtrade Database）數(shù)據(jù)，2000—2016年我國肉類進口的年均增長率為8.8%，并且在未來將進一步增長，這使得我國養(yǎng)殖業(yè)將面臨空前的機遇。然而，目前動物疫病在世界范圍不斷蔓延，也使得我國養(yǎng)殖產業(yè)面臨著極大的威脅，獸用生物制品的開發(fā)與應用就顯得尤為重要。在我國，疫苗仍是主要的獸用生物制品，在預防各類動物疾病中起著重要作用，所以要通過不斷的探索來提高疫苗質量，從而更好地為人類社會創(chuàng)造更多的價值。在疫苗的生產過程中越來越多的應用到細胞培養(yǎng)技術，而在漫漫人類歷史長河之中，細胞培養(yǎng)也只不過經歷了短短六、七十年的時間，卻給人類創(chuàng)造了無限的可能，為許多的生物科學的開展起到了推動作用，現(xiàn)已成為研究領域里一大熱點。細胞的體外培養(yǎng)條件要求很高，溫度、氣壓、緩沖環(huán)境、營養(yǎng)、pH值等都會影響到細胞的生長。
在西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠的小反芻獸疫活疫苗（Clone 9株）生產過程中也涉及細胞培養(yǎng)過程，此次研究旨在探索細胞生長過程中血清對其生長的影響以及最適宜生產過程的血清比例，以期為獸用疫苗生產中的細胞培養(yǎng)提供科學依據(jù)和理論參考。
一、材料與方法
1.地理位置。西藏自治區(qū)位于我國西南邊陲，是五個少數(shù)民族自治區(qū)之一，地處北緯26.50至36.53，東經78.25至99.06之間，平均海拔4000米以上，素有“世界屋脊”之稱。拉薩則是其首府，位于西藏高原的中部，喜馬拉雅山脈北側，海拔3650米，地處雅魯藏布江支流拉薩河中游河谷平原，全年多晴朗天氣，降雨稀少，全年日照時間在3000小時以上。
實驗室位于拉薩北郊西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠廠區(qū)，實驗室內配備生物安全柜、超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、倒置顯微鏡以及滿足實驗的基本材料和無菌環(huán)境。
圖1細胞生長隨血清比例增加的生長情況
2.研究方法。實驗材料均來自西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠，于2017年4月開始準備。提前制造實驗室無菌環(huán)境，選取7個25毫升克式瓶作為傳代容器備用，并標記好所用細胞種類及細胞代次、傳代時間、血清比例，此次用于傳代的細胞為DBN細胞F22，血清種類為馬血清，血清比例依次為0.15毫升（1%）、0.3毫升（2%）、0.45毫升（3%）、0.6毫升（4%）、0.75毫升（5%）、0.9毫升（6%）、1.05毫升（7%）。在超凈工作臺中進行傳代工作，并將克式瓶移至CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)及觀察。
3.數(shù)據(jù)記錄與分析。從4月17日開始觀察細胞生長情況并如實記錄，記錄結果如表1。為方便比較數(shù)據(jù)之間的差異，特將實驗觀察結果表述為較差、差、良好三種情況，并記錄為表2。使用Microsoft excel 2010軟件處理數(shù)據(jù)，以時間為橫坐標，細胞生長情況為縱坐標，用圖表工具中的柱狀圖對血清比例與細胞生長之間的相互關系進行分析，并作圖（圖1）。
表1各營養(yǎng)液梯度細胞生長情況
表2細胞生長隨血清比例增加的生長情況
二、結果分析
經數(shù)據(jù)處理，并做出簡略柱狀圖來表示細胞生長情況與血清濃度之間的相互關系。由圖表可知，在此次實驗中，隨著血清比例的增加細胞生長情況逐漸變好，而且細胞數(shù)量依次增加。同一環(huán)境下，血清濃度對細胞生長情況的影響呈現(xiàn)出先增加后減弱的拋物線狀現(xiàn)象。
三、討論與結論
本次實驗觀察是從細胞培養(yǎng)后的第三天開始的，主要是因為在小反芻獸疫活疫苗的細胞培養(yǎng)周期為6日，本次實驗結論定為最適血清4%～6%是根據(jù)拋物線軸對稱特性，故將5%血清定為適宜細胞生長的條件。
通過對實驗數(shù)據(jù)的觀察分析可以發(fā)現(xiàn)，此次實驗中細胞的生長對血清的依賴度還是較大的，低濃度下對細胞存在抑制作用，而高濃度血清條件下可促進細胞的生長。但作為疫苗生產中的細胞培養(yǎng)過程，并不是血清濃度越高越好，從數(shù)據(jù)中可以看出，血清濃度到達一定高度后使得細胞生長過量，影響細胞生長情況的觀察。因此，為更好地配合生產需求以及節(jié)約成本考慮，細胞培養(yǎng)中加入4%～6%的血清量最為合適。