檢測多株益生菌和多株致病菌，綜合比較各益生元的益生活性
益生元的種類很多，如低聚半乳糖，低聚果糖，菊粉，低聚木糖，2’-巖藻糖基乳糖等。目前使用一種代表性的益生菌和一種代表性的腸道菌，以同時促進有益菌和致病菌的葡萄糖作為陽性對照，按照如下公式進行檢測計算：和代表培養24h和0h時有益菌在益生元上培養的活菌落形成單位(CFU)/mL，和代表培養24h和0h時有益菌在葡萄糖上培養的活菌落形成單位(CFU)/mL，和代表培養24h和0h時腸道菌在益生元上培養的活菌落形成單位(CFU)/mL，和代表培養24h和0h時腸道菌在葡萄糖上培養的活菌落形成單位(CFU)/mL。評分的設計要求益生元促進有益菌生長，而不支持致病菌生長，以體現益生元定義中的“選擇性”。
但僅以單一菌株評分主觀性太強。腸道有益菌(雙歧桿菌，乳桿菌，芽孢桿菌等)和致病菌(坂崎腸桿菌，空腸彎曲桿菌，克雷伯氏菌等)種類眾多，因此益生元檢測計算結果完全取決于選定的菌株。而且，公式從表象反映益生菌的數目，不能直觀反映益生元是否被益生菌所利用。另外，活菌落形成單位的實驗周期長，實驗精度要求高，容易產生誤差。因此，通過檢測多株益生菌和多株致病菌來反映益生元活性是更有效準確的方式，能夠綜合且橫向比較各益生元的益生活性。
一種基于多菌株的益生活性檢測步驟：
步驟一，選取用于益生活性待檢測的菌株，菌株包括有益菌和致病菌，菌株數目大于3；
步驟二，以待評益生元作為培養基唯一碳源對選取的菌株進行培養，葡萄糖碳源培養基作為陽性對照組，無糖培養基作為空白組；
步驟三，獲取步驟二中所有菌株的生長值，以培養過程中各時間點的OD600吸光值繪制生長曲線，計算生長曲線下面積，進而計算各菌株的生長值；
步驟四，獲取菌株對益生元的利用值，對每個菌株的培養前和培養后菌液上清進行薄層層析圖譜分析，計算薄層層析圖譜中益生元的消耗量，進一步計算各菌株的益生元利用值；
步驟五，通過步驟三中的生長值和步驟四中的益生元利用值計算益生活性。
菌株純培養
選取4種益生元：半乳低聚糖，巖藻寡糖，2’-巖藻糖基乳糖和巖藻糖，葡萄糖作為陽性對照組，無糖培養基為空白組。選取4株益生菌：1株雙歧桿菌，1株乳桿菌，1株丁酸梭菌，1株糞腸球菌。4株潛在致病菌：1株大腸桿菌，1株沙門氏菌，1株克雷伯氏菌，1株產氣莢膜梭菌。用酶標儀從初始0h開始每12h測定菌液OD600值，上清液用于薄層層析。
基于OD600值的生長曲線下面積(AUC)計算。
生長值測定：以0h、12h、24h、36h、48h的OD600值繪制生長曲線，并通過積分計算曲線下面積(AUC；OD600×min)。益生元X的AUC值減空白組M的AUC值為菌株的生長值，公式如下：
由各菌株的生長曲線和生長值可知，同一益生元，不同菌株的生長情況不同。葡萄糖對有益菌株和潛在致病菌均有較好的促生長能力，而低聚半乳糖除了顯著促進有益菌生長，也部分促進潛在致病菌生長。巖藻寡糖能夠促進3株有益菌生長，基本不支持潛在致病菌生長。2’-巖藻糖基乳糖僅被1株有益菌利用，但嚴格不支持潛在致病菌的生長。巖藻糖不能促進大部分菌株增殖，甚至對糞腸球菌和大腸桿菌的生長具有部分抑制作用。
表1各菌株的生長值
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