不同質(zhì)量濃度水飛薊賓對6種標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長抑制曲線（二）
3、結(jié)果
3.1水飛薊賓及同分異構(gòu)體對標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC
結(jié)果見表1。水飛薊賓對革蘭陽性菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC為50～400μg/mL，對表皮葡萄球菌表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑菌活性，MIC值為50μg/mL。水飛薊賓對革蘭陰性菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌效果明顯低于革蘭陽性菌，MIC值＞400μg/mL；在水飛薊賓的同分異構(gòu)體中，僅異水飛薊賓表現(xiàn)出對表皮葡萄球菌、屎腸球菌和糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株有一定的抑菌活性（MIC為400μg/mL）。水飛薊賓的抑菌活性明顯高于其同分異構(gòu)體。
3.2水飛薊賓對臨床分離菌株的MIC
結(jié)果見表2。水飛薊賓對表皮葡萄球菌臨床分離菌株的MIC值分布為＞400、400、200、100μg/mL，對應(yīng)菌株占比分別為20.0%、40.0%、20.0%、20.0%；對金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌臨床分離菌株的MIC值分布為＞400、400μg/mL；對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌臨床分離菌株的MIC值均＞400μg/mL。表皮葡萄球菌的MIC值分布與其他測試菌種比較，差異顯著（P＜0.05）。
3.3抗生素對標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離菌株的MIC
結(jié)果見表3和4。臨床常用抗生素對標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC值符合CLSI對非苛養(yǎng)菌的MIC質(zhì)量控制允許范圍。
3.4水飛薊賓對標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長抑制曲線檢測結(jié)果
結(jié)果見圖1。對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌，培養(yǎng)液中水飛薊賓濃度為0.5 MIC時(shí)菌體繁殖速度減慢；當(dāng)藥物濃度為1 MIC或2 MIC時(shí)菌體繁殖速度受到明顯抑制，在培養(yǎng)的16 h內(nèi)菌體濃度與初始濃度相比基本無變化。大腸埃希菌和銅綠假單胞菌生長曲線不受水飛薊賓影響，在培養(yǎng)的16 h內(nèi)與對照組的菌體數(shù)量及繁殖速度基本一致。
3.5水飛薊賓與臨床常用抗生素對標(biāo)準(zhǔn)菌株的聯(lián)合抑菌效應(yīng)
FIC值結(jié)果見表5。水飛薊賓與青霉素聯(lián)合，對表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌有相加作用，對屎腸球菌和糞腸球菌是無關(guān)作用。水飛薊賓與紅霉素聯(lián)合，對表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌分別為協(xié)同和相加作用，對屎腸球菌和糞腸球菌是無關(guān)作用。水飛薊賓與環(huán)丙沙星聯(lián)合，對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌均為拮抗作用。水飛薊賓與慶大霉素聯(lián)合，對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌均為無關(guān)作用。
3.6水飛薊賓與臨床常用抗生素對臨床分離菌株的聯(lián)合抑菌效應(yīng)
FIC值結(jié)果見表6和7。水飛薊賓與青霉素聯(lián)合，對表皮葡萄球菌和糞腸球菌的FIC值分布差異顯著（P＜0.01），對表皮葡萄球菌主要是相加作用，對糞腸球菌主要是無關(guān)作用；菌種間FIC值分布的其余兩兩比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。水飛薊賓與紅霉素聯(lián)合，對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌及屎腸球菌的FIC值分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。水飛薊賓與環(huán)丙沙星聯(lián)合，對大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的FIC值分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；水飛薊賓與慶大霉素聯(lián)合，對大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的FIC值分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
水飛薊賓與青霉素聯(lián)合對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌和糞腸球菌的FIC值分布，與水飛薊賓與紅霉素聯(lián)合對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌和糞腸球菌的FIC值分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。水飛薊賓與環(huán)丙沙星聯(lián)合對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的FIC值分布，與水飛薊賓與慶大霉素聯(lián)合對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的FIC值分布比較，差異顯著（P＜0.05），水飛薊賓與環(huán)丙沙星聯(lián)合對這2種細(xì)菌的聯(lián)合抑菌效應(yīng)均以拮抗為主，水飛薊賓與慶大霉素聯(lián)合對這2種細(xì)菌的聯(lián)合抑菌效應(yīng)均以無關(guān)為主。
4、討論
抗生素濫用在醫(yī)療、食品安全、動物養(yǎng)殖和環(huán)境等方面引起的問題日趨嚴(yán)重。尋找并應(yīng)用其他抗菌物質(zhì)控制耐藥性細(xì)菌或用于食品防腐逐漸引起關(guān)注。從天然植物中尋找抗菌資源，篩選抗菌藥物越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的重視[16]。近年來水飛薊素的抗菌活性逐漸引起了人們的關(guān)注[17-21]，但大多數(shù)研究是關(guān)于水飛薊素混合物，而對單體的抑菌活性、抑菌譜及其與抗生素聯(lián)合抑菌效應(yīng)報(bào)道極少。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，水飛薊賓對臨床常見感染細(xì)菌的抑菌活性明顯高于其他同分異構(gòu)體（異水飛薊賓、水飛薊亭和水飛薊寧），表明水飛薊賓為水飛薊素的主要抑菌活性成分。黃酮類化合物的抑菌活性具有構(gòu)效關(guān)系，分子中的電荷密度、A環(huán)羥基化與親脂性取代基團(tuán)能增強(qiáng)抑菌活性，分子結(jié)構(gòu)中較多酚羥基，可與蛋白質(zhì)、酶等以氫鍵結(jié)合而使其失去活性，從而起到抑菌的作用[6,11]。水飛薊賓對革蘭陽性試驗(yàn)菌的抑菌活性顯著高于革蘭陰性試驗(yàn)菌，這可能與細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)差異有關(guān)，水飛薊素（賓）可破壞革蘭陽性菌-金黃色葡萄球菌和糞腸球菌的細(xì)胞壁[12,18]。水飛薊賓對表皮葡萄球菌的抑菌活性最強(qiáng)，標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離菌株的MIC值分別為50μg/mL和100～400μg/mL；對金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、屎腸球菌的抑菌效果不佳，這些標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離菌株的MIC值分別為400μg/mL和≥400μg/mL。Evren等[19]報(bào)道水飛薊素對金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、耐萬古霉素腸球菌和糞腸球菌的MIC值為60～120μg/mL，水飛薊賓占水飛薊素的60%～70%，據(jù)此可推出水飛薊賓對這些細(xì)菌的MIC值應(yīng)低于60～120μg/mL。水飛薊賓單體對這些細(xì)菌的MIC值明顯高于水飛薊素，這可能與水飛薊素為含多種成分的混合物，存在協(xié)同抑菌作用及藥物純度有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道[6]甘草乙醇浸膏中甘草酸和甘草渣總黃酮具有協(xié)同抑菌作用。鑒于上述結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)選用抑菌活性最好的水飛薊賓進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，水飛薊賓對多重耐藥菌的抑菌活性明顯低于敏感菌株。這與Jung等[20]的研究結(jié)果存在較大差異。與標(biāo)準(zhǔn)菌株比較，水飛薊賓對臨床分離菌株顯示較低的抑菌活性，在相同菌種臨床分離菌株間MIC也存在較大差異，這可能主要是因?yàn)榫觊g存在不同耐藥機(jī)制，如細(xì)菌同時(shí)產(chǎn)生多種抗生素水解酶、鈍化酶、修飾酶，或存在外排泵系統(tǒng)，或藥物作用靶位改變等，這些都可使藥物的抑菌作用降低。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，水飛薊賓對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌的生長都有明顯抑制作用，抑制效果隨藥物質(zhì)量濃度的增加而增加。水飛薊賓對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的生長沒有抑制作用。這也驗(yàn)證了水飛薊賓能抑制革蘭陽性菌生長，而對革蘭陰性菌生長無抑制作用。
臨床上中西藥聯(lián)合應(yīng)用較為廣泛，中藥和化學(xué)藥聯(lián)合應(yīng)用可取長補(bǔ)短利于疾病治療、減少耐藥菌發(fā)生、降低或減少毒副作用。聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對革蘭陽性試驗(yàn)菌，水飛薊賓與青霉素/紅霉素聯(lián)合抑菌效應(yīng)以相加和無關(guān)作用為主，無協(xié)同和拮抗作用。水飛薊賓與青霉素/紅霉素聯(lián)合用藥，對青霉素/紅霉素耐藥的菌株，不能降低細(xì)菌對青霉素/紅霉素的耐藥程度和使其耐藥性逆轉(zhuǎn)；但對青霉素/紅霉素敏感的菌株，可降低青霉素/紅霉素的臨床用藥劑量，降低或減少毒副作用與不良反應(yīng)。對革蘭陰性試驗(yàn)菌，水飛薊賓與環(huán)丙沙星聯(lián)合抑菌效應(yīng)以拮抗作用為主，無協(xié)同和相加作用。水飛薊賓與環(huán)丙沙星聯(lián)合用藥，不僅不能降低環(huán)丙沙星耐藥菌株對環(huán)丙沙星的抗藥性，反而增加其抗藥性；對環(huán)丙沙星敏感菌株，需增加環(huán)丙沙星的臨床用藥劑量，更易引起毒副作用或不良反應(yīng)。水飛薊賓與慶大霉素聯(lián)合抑菌效應(yīng)以無關(guān)作用為主，少數(shù)可產(chǎn)生拮抗作用，無協(xié)同和相加作用。水飛薊賓與慶大霉素聯(lián)合用藥，不能降低慶大霉素耐藥菌株的耐藥程度和使其耐藥性逆轉(zhuǎn)，有可能增強(qiáng)其抗藥性；對慶大霉素敏感菌株，不能降低慶大霉素的臨床用藥劑量，致水飛薊賓的無意義用藥。但水飛薊賓可減少慶大霉素產(chǎn)生的活性氧，減輕其引起的腎臟毒性。
不同質(zhì)量濃度水飛薊賓對6種標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長抑制曲線（一）
不同質(zhì)量濃度水飛薊賓對6種標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長抑制曲線（二）
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