Ia型和III型無乳鏈球菌生長特性差異性比較
根據(jù)莢膜多糖的類型，無乳鏈球菌分為10種不同的血清型(Ia、Ib、II-IX型)，其中Ia型和III型是無乳鏈球菌感染人、牛和魚的主要血清型。目前對(duì)于不同血清型無乳鏈球菌間生物學(xué)特性差異分析的報(bào)道還很缺乏。本實(shí)驗(yàn)對(duì)兩株血清型分別為Ia型和III型的齊口裂腹魚源無乳鏈球菌在生長特性、生理生化特性進(jìn)行差異性比較，為探究該病原菌不同血清型的致病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1、實(shí)驗(yàn)條件設(shè)定
1.1兩株菌體外生長曲線的測定用BHI液體培養(yǎng)基將兩種細(xì)菌的菌液OD600nm值調(diào)整一致后分別接種于BHI液體培養(yǎng)基中28℃、180 r/min培養(yǎng)，每隔2 h取樣，測定其OD600nm值，直至OD600nm值不再增長為止，繪制兩株菌的體外生長曲線。
1.2溫度、pH值、鹽濃度對(duì)兩株菌生長的影響在BHI液體培養(yǎng)基中接入等量兩株菌的菌液，分別在24℃、28℃、32℃和37℃，pH為5.0、6.0、7.0、8.0和9.0，氯化鈉濃度為0、0.5%、1%、2%、4%和8%條件下180 r/min震蕩培養(yǎng)，每隔4 h取樣測定兩種菌菌液OD600nm值，分別繪制溫度、pH、鹽濃度對(duì)兩株菌生長影響的生長曲線。
2、結(jié)果
2.1兩株菌的生理生化特性的測定VITEK 2 COMPACT 30全自動(dòng)細(xì)菌分析系統(tǒng)檢測和補(bǔ)充生化試驗(yàn)結(jié)果見表1，結(jié)果表明S03株和S07株在生理生化特性上表現(xiàn)出明顯差異，S07株相對(duì)于S03株缺乏利用多種糖類、代謝酶的能力。
表1 S03和S07株S.agalactiae的生化試驗(yàn)結(jié)果
2.2兩株菌體外生長曲線的測定血清III型S03株和Ia型S07株的生長曲線顯示，S03株的對(duì)數(shù)期在6 h～18 h，20 h以后進(jìn)入穩(wěn)定期；S07株的對(duì)數(shù)期在20 h～42 h，46 h以后進(jìn)入穩(wěn)定期(圖1)。表明，S03株的生長明顯快于S07株，而且S03株的OD600nm最大值約是S07株的2倍。
圖1 S03株和S07株的生長曲線
2.3溫度、pH和鹽濃度對(duì)兩株菌生長的影響
溫度對(duì)S03株和S07株影響的生長曲線顯示，以28℃時(shí)的生長曲線為參考，S03株和S07株在32℃和24℃時(shí)其生長受溫度影響的趨勢(shì)相對(duì)一致，而S03株在37℃時(shí)生長速度較快，S07株在37℃時(shí)不生長(圖2)。表明S03株對(duì)溫度的耐受能力強(qiáng)于S07株。
pH對(duì)S03株和S07株影響的生長曲線顯示，以在pH7.0時(shí)的生長曲線為參考，S03株和S07株在pH6.0、pH8.0和pH9.0時(shí)變化基本一致，而在pH5.0時(shí)，S03株的生長受其影響程度要小于S07株(圖3)。表明S03株對(duì)pH的耐受能力強(qiáng)于S07株。
鹽度對(duì)S03株和S07株影響的生長曲線顯示，以鹽度為0時(shí)生長曲線為參考，在鹽度分別為0.5%、1%、和8%時(shí)S03株和S07株生長曲線變化趨勢(shì)基本一致，但在鹽度為2%時(shí)，S03株生長受其影響較小，S07株生長則明顯受到抑制，而且在鹽度為4%時(shí)，S03株能夠生長但S07株不能生長(圖4)。表明S03株對(duì)鹽濃度耐受能力強(qiáng)于S07株。
圖2溫度對(duì)S03株和S07株生長影響的生長曲線
圖3 pH對(duì)S03株和S07株生長影響的生長曲線
圖4鹽度對(duì)S03株和S07株生長影響的生長曲線
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