產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌噬菌體分離、超離、宿主譜鑒定及生長曲線繪制（三）
3討論
目前，國內(nèi)從事產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌噬菌體的研究，多見于產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌噬菌體裂解酶、噬菌體蛋白對(duì)于李氏桿菌的快速檢測(cè)、產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌溶源性噬菌體的誘導(dǎo)與鑒定等。對(duì)于產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌裂解性噬菌體的分離鑒定及臨床應(yīng)用相關(guān)研究較少，而國外此方面研究相對(duì)較多，美國、加拿大和瑞士已使用LISTEXP100用以防治產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌所引起的食品安全問題；LP8與國外LISTEXP100產(chǎn)品相比，具有作用時(shí)間短、作用溫度范圍廣、保存時(shí)效性長等特點(diǎn)。LP8在25～45℃具有很高的活性，而且在55℃時(shí)，LP8噬菌體的效價(jià)仍能保持在2.1×10PFU·mL。
Song等測(cè)定3種LM噬菌體LP020、LP027、LP094的一步生長曲線結(jié)果顯示，這3種LM噬菌體的潛伏期都在45～60 min，LP8的潛伏期在23 min左右，80 min便達(dá)到平臺(tái)期，平臺(tái)期最高效價(jià)4種噬菌體都在1×10PFU·mL以上，具有相同效果，但LP8作用速度更快。Lee等從雞糞樣品中分離到的兩種LM噬菌體LMP1和LMP7對(duì)ATCC7644、ATCC15313、ATCC19114、ATCC19115四種LM具有裂解性。LP8除了對(duì)18株產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌具有裂解性外，對(duì)5株威爾斯李氏桿菌(9-2、4-40、C10、C59、4-43)也具有裂解性，說明LP8具有跨種裂解性，且有較高的感染復(fù)數(shù)。綜上，LP8具有更好的生物制劑開發(fā)前景。
本試驗(yàn)分離得到的噬菌體中，有30%的噬菌體會(huì)在純化階段不能穩(wěn)定傳代而丟失，表明丟失的噬菌體本身裂解能力并不強(qiáng)。司樨東提出，噬菌體在感染宿主菌的過程中，部分基因會(huì)整合到宿主菌的基因組中，在一定條件下并不會(huì)立即表達(dá)，裂解性噬菌體基因有成為溶原性噬菌體基因的可能性，也會(huì)影響噬菌體的表達(dá)。在本試驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)瓊脂的濃度較低時(shí)，噬菌斑會(huì)變大，顏色更透亮。究其原因，下層瓊脂一般為營養(yǎng)瓊脂，較硬的質(zhì)地為上層瓊脂提供支持和營養(yǎng)作用，上層瓊脂質(zhì)地較軟，噬菌體受到本身構(gòu)造限制，其穿行能力較弱，如果僅限于培養(yǎng)細(xì)菌涂布后干燥的平板表面條件，噬菌體對(duì)周圍的細(xì)菌沒有侵襲能力，很小的作用范圍并不支持形成肉眼可見的噬菌斑，而且噬菌斑能被肉眼觀察，是由于在噬菌斑內(nèi)沒有細(xì)菌生長，與周圍生長有細(xì)菌的瓊脂形成色差導(dǎo)致。我們?cè)谄胀ü鈱W(xué)顯微鏡下觀察噬菌斑，發(fā)現(xiàn)噬菌斑相較于周圍瓊脂較低，形成一個(gè)略淺的凹陷，裂解挑斑發(fā)現(xiàn)噬菌斑本身具有一定厚度，與周圍正常瓊脂相比，厚度約減少1/5，可能是由于噬菌斑內(nèi)生長的細(xì)菌被侵蝕死亡而造成的坍縮導(dǎo)致。
通過對(duì)LP8全基因組序列進(jìn)行對(duì)比，確定本試驗(yàn)所分離的噬菌體為李氏桿菌新噬菌體，噬菌體基因組編碼區(qū)占基因組大小的80%以上。所編碼的基因中，76個(gè)基因與沙門菌噬菌體、大腸桿菌噬菌體、歐文菌噬菌體、檸檬酸桿菌噬菌體中的部分基因具有高度相似性，基因組序列單一覆蓋率最大7%，累計(jì)覆蓋率38.4%?；蚪M所編碼的120個(gè)基因與噬菌體基因數(shù)據(jù)庫中的基因相似性都很低，其中44個(gè)基因功能未知，以上現(xiàn)象說明LP8在進(jìn)化過程中可能經(jīng)歷了復(fù)雜的基因水平轉(zhuǎn)移、突變、重組等過程，也有可能是由其他噬菌體演化而來。
4結(jié)論
LP8相較于其他噬菌體，熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，酸堿耐受范圍更廣，對(duì)有機(jī)溶劑的抵抗性更高，對(duì)LM具有強(qiáng)裂解性，并且可以跨種裂解李氏桿菌。因此，LP8噬菌體在未來的噬菌體生物制劑的研發(fā)過程中，具有一定的開發(fā)潛力。
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