?刺糖多孢菌生長曲線的測定與最佳培養溫度
刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)屬糖多孢菌屬,是一種好氧型革蘭氏陽性的非抗酸性放線菌,其有氧發酵可產生次級代謝產物多殺菌素。多殺菌素是一種新型高效的生物殺蟲劑,主要用于農林蟲害、儲糧蟲害、衛生蟲害、牲畜寄生蟲害的防治,其產品目前主要用在棉花、果蔬、茶葉、煙草、中草藥、糧食等作物上。
將試驗菌種接種于新鮮斜面培養基中,29℃培養7 d,用無菌水制備成數量級為108個/mL的孢子懸液,按1%接種量接入種子培養基,于29℃搖床培養7 d。搖瓶裝液量為30 mL/250 mL,玻璃珠6個,搖床轉速為240 r/min,偏心距為26 mm。每12 h取樣,測定樣品的生物量和pH,以上試驗設3次重復。
測定結果
圖1刺糖多孢菌的生長曲線
刺糖多孢菌C3-10-4的生長曲線見圖1。從圖1中可以看出,菌株在生長36 h后進入對數生長期,72 h后進入平穩期。pH呈現穩步增長的趨勢,變化范圍從pH 6.9到8.9,當pH>8.7時,菌絲體出現斷裂,開始自溶。pH是影響菌株體內各種酶活性的重要因素,pH的變化會引起酶活力的改變,從而影響菌株在培養過程中的代謝速度,甚至改變其代謝途徑和細胞結構[18]。菌絲繁殖到一定程度后,由于養分的耗盡以及代謝產物的積累,菌體量不再增加,菌絲體逐漸老化,工業發酵生產中,要選擇菌體處在生命力極為旺盛的對數生長期,且培養液的菌體量未達到高峰的時期作為移種時間。從生長曲線來看,刺糖多孢菌最適種齡在60~70 h為宜。
小結:
種子的質量是發酵能否正常進行的重要因素之一,通過對刺糖多孢菌種子培養基的篩選與研究,確定其最佳培養溫度29℃、搖床轉速240 r/min、玻璃珠個數6個、搖瓶裝液量30 mL/250 mL。利用Gompertz方程對生長曲線進行擬合,得到擬合曲線方程為:X=8.420exp[-exp(2.183-0.057 5t)]
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