生活飲用水菌落總數(shù)測(cè)定方法及影響因素（二）
5.樣品重復(fù)性測(cè)定
在微生物檢驗(yàn)中，樣品中細(xì)菌分布的均勻性和重復(fù)測(cè)定帶來的誤差是影響檢測(cè)結(jié)果的主要因素之一。根據(jù)濰坊地區(qū)水質(zhì)的特點(diǎn)，對(duì)三種細(xì)菌密度的水樣進(jìn)行測(cè)定。
（1）質(zhì)控樣品的重復(fù)性測(cè)定
采用美國IDEXX公司生產(chǎn)的HPC/TVC（E.faecalis）質(zhì)控樣品，真值20 CFU/mL，可接受范圍2～38 CFU/mL，重復(fù)檢測(cè)20次，檢測(cè)結(jié)果如表2所示。
平板間誤差規(guī)定要求≤10%，但在實(shí)際工作中有時(shí)不易達(dá)到。從表2中可以看出，最大值與最小值的誤差為28.57%，大于10%，但20次檢測(cè)結(jié)果均接近于真值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為9.72%。周紅雨曾在《泊松分布應(yīng)用于菌落總數(shù)質(zhì)量控制》一文中闡明，當(dāng)時(shí)，平行平板a1、a2之間的計(jì)數(shù)結(jié)果較理想。從表2中可知，20組數(shù)據(jù)符合泊松分布，最大值為24 CFU/mL，最小值為18CFU/mL，符合上述公式。因此，在實(shí)際檢測(cè)工作中，當(dāng)菌落總數(shù)測(cè)定值為10～30 CFU/mL時(shí)，可以用判定平行平板檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
表2質(zhì)控樣品重復(fù)測(cè)定結(jié)果
表3菌落總數(shù)較低時(shí)，水樣品菌落總數(shù)重復(fù)性測(cè)定結(jié)果
表4菌落總數(shù)較高水樣品菌落總數(shù)重復(fù)性測(cè)定結(jié)果
（2）水樣品重復(fù)性測(cè)定
在日常水質(zhì)監(jiān)督檢測(cè)時(shí)，由于各縣市區(qū)水質(zhì)特點(diǎn)、生產(chǎn)工藝等有所差別，因此出廠水及管網(wǎng)水的菌落總數(shù)結(jié)果各有不同。通過對(duì)2010—2014年濰坊地區(qū)生活飲用水衛(wèi)生狀況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)水廠消毒較好，菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果在30 CFU/mL以下，甚至有些水廠的出廠水、管網(wǎng)水菌落總數(shù)未檢出，只有個(gè)別水廠水樣結(jié)果偏高甚至出現(xiàn)超標(biāo)情況。結(jié)合工作實(shí)際，對(duì)這兩種情況的重復(fù)性分別分析，初步確定平行平板間的判定標(biāo)準(zhǔn)，為以后的工作提供參考。
①菌落計(jì)數(shù)結(jié)果小于10CFU/mL時(shí)的重復(fù)性
在生活飲用水菌落總數(shù)測(cè)定時(shí)，菌落總數(shù)結(jié)果較低，此時(shí)重復(fù)性測(cè)定如表3所示。
根據(jù)北歐標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，自身同一梯度平行加樣兩皿間的相對(duì)誤差小于7.7%。但是，實(shí)際工作有時(shí)很難達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)，特別是在菌落總數(shù)較低時(shí)，如表3中的數(shù)據(jù)顯示，菌落總數(shù)均小于10 CFU/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差達(dá)到38.25%。然而通過計(jì)算可知，表3中數(shù)據(jù)符合，并且Grubbs檢驗(yàn)后均無異常值。因此，菌落總數(shù)測(cè)定結(jié)果小于10 CFU/mL時(shí)，可以用判定平行平板檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
②菌落計(jì)數(shù)結(jié)果為30～300CFU/mL時(shí)的重復(fù)性
將峽山水庫水樣稀釋10倍，重復(fù)測(cè)定20次，以此反映菌落總數(shù)結(jié)果較高時(shí)的重復(fù)性，僅供參考。結(jié)果如表4所示。
從表4中可以看出，菌落計(jì)數(shù)結(jié)果在30～300 CFU/mL時(shí)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.4%，符合北歐標(biāo)準(zhǔn)。而且通過計(jì)算可知，表4數(shù)據(jù)符合，經(jīng)Grubbs檢驗(yàn)后均無異常值。可見，菌落總數(shù)較高時(shí)精密度較高，結(jié)果更準(zhǔn)確。當(dāng)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果在30～300 CFU/mL之間時(shí)，可以用a1+判定平行平板檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
三、結(jié)論
①在生活飲用水菌落總數(shù)質(zhì)控過程中，除了設(shè)施環(huán)境、培養(yǎng)基、培養(yǎng)箱溫度等硬件需滿足要求外，樣品重復(fù)性、檢測(cè)時(shí)間、培養(yǎng)時(shí)間、檢測(cè)人員讀數(shù)等也是影響結(jié)果的主要因素，不同人員對(duì)同一平板讀數(shù)引起的誤差較小，在實(shí)際工作中可以作為次要因素考慮。
②檢測(cè)時(shí)間和培養(yǎng)時(shí)間是質(zhì)量控制的主要因素之一，應(yīng)嚴(yán)格規(guī)范操作。微生物水樣的運(yùn)輸及保存均應(yīng)冷藏，樣品取來后應(yīng)立即檢測(cè)，最長(zhǎng)不宜超過24 h。
③培養(yǎng)時(shí)間因樣品細(xì)菌種類的純度對(duì)結(jié)果的影響有所不同。對(duì)于細(xì)菌種類單一的質(zhì)控樣品，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)，其結(jié)果沒有明顯的變化；而對(duì)于種類復(fù)雜的水樣品，培養(yǎng)時(shí)間對(duì)其結(jié)果的影響較大，培養(yǎng)時(shí)間最好控制在48±2 h。
④菌落總數(shù)的高低可能會(huì)導(dǎo)致重復(fù)性的不同。計(jì)數(shù)結(jié)果在30～300 CFU/mL之間時(shí)，精密度為4.4%，重復(fù)性好；計(jì)數(shù)結(jié)果較低（小于10 CFU/mL）時(shí)，精密度為38.25%，重復(fù)性較差；計(jì)數(shù)結(jié)果在10～30 CFU/mL之間時(shí)，精密度為9.72%，重復(fù)性較好。
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