水貂李氏桿菌的分離鑒定、生化試驗、藥敏實驗、毒力試驗——結(jié)果、討論
2結(jié)果與分析
2.1細(xì)菌鏡檢與培養(yǎng)結(jié)果
病死水貂解剖，可見肺臟肉變、脾臟腫大、肝臟土黃色、腦水腫，心血、肝臟、肺臟、腦組織觸片，火焰固定，革蘭氏染色呈現(xiàn)陽性桿菌，肺臟未發(fā)現(xiàn)，心血、肝視野中少量幾個菌，腦組織視野中多處可見，菌體呈現(xiàn)規(guī)則短桿狀，多數(shù)散在，個別呈現(xiàn)V形。接種平板37℃溫箱培養(yǎng)24h可見，麥康凱瓊脂平板、SS瓊脂平板不生長，營養(yǎng)瓊脂平板生長少量，10%血清營養(yǎng)瓊脂平板、10%兔鮮血瓊脂平板生長良好，多量較小、圓形、光滑的菌落，鮮血瓊脂可見明顯的溶血環(huán)。
2.2細(xì)菌的生化結(jié)果
分離細(xì)菌接種生化反應(yīng)管第3天觀察記錄結(jié)果，留樣繼續(xù)觀察至第7天，可見發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、果糖、鼠李糖、海藻糖、糊精、水楊苷、蔗糖、乳糖，結(jié)果呈現(xiàn)陽性，不發(fā)酵阿拉伯糖、棉實糖、衛(wèi)矛醇、木糖，呈現(xiàn)陰性。甲基紅MR和VP試驗均為陽性，具體結(jié)果見表1。
表1分離菌生化鑒定結(jié)果
注：“—”表示陰性，“+”表示陽性
2.3細(xì)菌的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果
將PCR產(chǎn)物送測序公司測序，根據(jù)測序公司返回的測序結(jié)果，采用Bioedit軟件進(jìn)行人工校對，然后輸入基因庫用Blastn軟件進(jìn)行相似性比較，比較后構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，與產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌相似性為99%，確定為李氏桿菌。
2.4病料PCR檢測結(jié)果
無菌取肝、脾臟、腦組織研磨，進(jìn)行基因擴(kuò)增，檢測腺病毒、狂犬病毒、偽狂犬病毒基因全部為陰性，排除腺病毒、狂犬病毒，偽狂犬病引起的神經(jīng)癥狀。
2.5犬瘟熱試紙檢測結(jié)果
病料滴于檢測孔，觀察試紙結(jié)果，C為對照紅色成立，T線無色，犬瘟熱抗原陰性。
2.6細(xì)菌的藥敏試驗結(jié)果
使用微生物快速藥敏監(jiān)測系統(tǒng)進(jìn)行藥敏試驗，37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察可見壯觀霉素、阿奇霉素、丁胺卡那霉素高敏，頭孢喹肟、頭孢噻呋、頭孢曲松、左氧氟沙星、多黏菌素中敏，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、林可霉素低敏。使具體藥敏結(jié)果見表2。
表2分離菌的藥敏結(jié)果(mm)
2.7毒力試驗結(jié)果
小白鼠腹腔注射菌液后2~3d死亡，呈現(xiàn)敗血癥，對照組觀察7d，健活；家兔眼結(jié)膜接種后，第2天開始發(fā)生化膿性的結(jié)膜炎，對照組觀察7d正常；水貂肌肉注射后第2~3天死亡，死亡前神經(jīng)癥狀，對照組觀察7d，健活。所有發(fā)病死亡小白鼠、家兔、水貂進(jìn)行解剖，細(xì)菌分離，可以分離到攻毒相同的李氏桿菌，鏡檢革蘭氏染色陽性小桿菌，有的呈現(xiàn)V形，在血清平板37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察可見透明露珠樣的菌落，鮮血平板可見明顯的溶血環(huán)。
3討論
3.1李氏桿菌的癥狀
李氏桿菌是人和多種禽、畜、野生動物共患的人獸共患病，在動物防疫和人的食品安全上都有重要的意義，不同動物有不同的臨床表現(xiàn)形式，需要區(qū)別診斷，主要的臨床特征是流產(chǎn)、神經(jīng)癥狀、敗血癥，單胃和新生動家畜是敗血癥，反芻獸草食動物是腦炎、流產(chǎn)、結(jié)膜炎，嚙齒類動物主要是敗血癥，豬表現(xiàn)敗血癥、流產(chǎn)、神經(jīng)癥狀等多種癥狀，毛皮動物發(fā)病主要是神經(jīng)癥狀，水貂發(fā)生李氏桿菌病，主要是神經(jīng)癥狀。
3.3水貂李氏桿菌病的鑒別診斷
臨床上水貂發(fā)生神經(jīng)癥狀的疾病比較多，需要鑒別診斷，特別是發(fā)生在斷奶后仔貂，其中維生素A缺乏、維生素B1缺乏、缺鈣、神經(jīng)性犬瘟熱、偽狂犬病、狂犬病、腺病毒感染、鏈球菌病等都有不同程度的神經(jīng)癥狀。維生素A缺乏、維生素B1缺乏屬于維生素缺乏，主要表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，一般不死亡，或者發(fā)病很長時間才死亡；缺鈣的主要癥狀是癱瘓，生長較快的水貂表現(xiàn)明顯，其他食欲、精神不受影響，不會引起死亡；神經(jīng)性犬瘟熱發(fā)病主要是發(fā)病后期的犬瘟熱，開始會有發(fā)熱、結(jié)膜炎等癥狀；偽狂犬病、狂犬病、腺病毒感染都是病毒性疾病，診斷需要病毒檢測，一般這幾種病毒病，發(fā)病都較少，但是需要從流行病學(xué)和實驗室診斷結(jié)合才能區(qū)別診斷；鏈球菌會引起的神經(jīng)癥狀，也會引起敗血癥死亡，需要實驗室的細(xì)菌分離鑒別診斷。實驗室進(jìn)行李氏桿菌診斷，鏡檢明顯的是革蘭氏陽性小桿菌，常見的致病性革蘭氏陽性小桿菌還有丹毒桿菌，需要區(qū)別診斷，不能僅僅通過鏡檢革蘭氏陽性確診。
3.3李氏桿菌的防治
李氏桿菌病可以發(fā)生在多種動物上，各種環(huán)境都是李氏桿菌生長繁殖的場所，水貂飼料主要是各種肉食，有的養(yǎng)殖場飼喂病死動物、有的飼料品質(zhì)不良或者被污染都會引發(fā)該病的發(fā)生。李氏桿菌的生長條件比較特殊，在1~45℃都可以生長，就是說放在冷藏的肉食若有李氏桿菌感染，細(xì)菌是一直生長的，這也是造成冷藏條件下引起食物中毒一個原因。李氏桿菌發(fā)病一般都是散發(fā)，平時注意的比較少，隨著養(yǎng)殖場發(fā)病的增多，需要特別的注意預(yù)防。減少水貂養(yǎng)殖場李氏桿菌病的發(fā)生，禁止飼喂來源不明的病死動物，植物性飼料保存得當(dāng)，特別注意滅鼠，老鼠會傳播李氏桿菌。發(fā)生疾病需要及時鑒別診斷，確診后及時使用抗生素預(yù)防治療，發(fā)生疾病的一般治療效果較差，關(guān)鍵是大群的預(yù)防。
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