25種天然植物精油對(duì)藍(lán)莓致病菌生長(zhǎng)曲線、抑制作用（一）
摘要：為降低藍(lán)莓采后遭受病原菌侵染引起嚴(yán)重腐爛而帶來的損失，本研究分離鑒定引起藍(lán)莓果實(shí)腐爛的致病菌并開發(fā)綠色安全的病害防治措施。通過組織分離法從自然發(fā)病的藍(lán)莓果實(shí)上獲得4種致病菌，形態(tài)學(xué)和分子鑒定表明4種病原菌分別為皮落青霉（Penicillium crustosum）、塔賓曲霉（Aspergillus tubingensis）、鏈格孢菌（Alternaria alternata）和串珠鐮刀菌（Fusarium verticillioides），致病力排序?yàn)槠ぢ淝嗝梗舅e曲霉＞鏈格孢菌＞串珠鐮刀菌。考慮到串珠鐮刀菌的致病性較弱，后續(xù)僅對(duì)其他3種致病菌進(jìn)行生長(zhǎng)發(fā)育條件分析。
結(jié)果表明，3種菌的最適生長(zhǎng)溫度在25～28℃之間，生長(zhǎng)曲線的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期均在66 h之內(nèi)，孢子均在12 h之內(nèi)萌發(fā)。進(jìn)一步探究了25種天然植物精油對(duì)致病菌的體外作用效果，發(fā)現(xiàn)多數(shù)精油對(duì)皮落青霉和塔賓曲霉的生長(zhǎng)均具有高效的抑制作用，其中2μL/mL的茉莉精油、丁香羅勒精油、山蒼子精油和紅景天精油體外能完全抑制4種菌的生長(zhǎng)，2μL/mL的續(xù)斷精油可抑制皮落青霉、塔賓曲霉和鏈格孢菌的生長(zhǎng)，對(duì)串珠鐮刀菌的抑菌率為97%。活體實(shí)驗(yàn)表明，山蒼子精油和茉莉精油熏蒸能顯著降低接種皮落青霉的藍(lán)莓果實(shí)病害發(fā)生，山蒼子精油作用效果優(yōu)于茉莉精油，有望作為控制藍(lán)莓貯藏病害的綠色替代措施。
藍(lán)莓（Vaccinium corymbosum L.）果實(shí)口感酸甜細(xì)膩，富含花青素等抗氧化物質(zhì)，具有較高的營(yíng)養(yǎng)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。隨著近年來人們對(duì)營(yíng)養(yǎng)健康的追求，鮮食藍(lán)莓的比例越來越高。但藍(lán)莓果實(shí)質(zhì)地柔軟、果皮薄，且成熟期集中在夏季高溫多雨季節(jié)，采后極易腐爛，貨架期非常短，這極大限制了藍(lán)莓果實(shí)的銷售半徑和降低了其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。研究表明，采后致病菌侵染是導(dǎo)致藍(lán)莓腐敗損失的主要原因之一。Wang Fei等在加利福尼亞州藍(lán)莓果實(shí)上分離出的致病菌有灰葡萄孢（Botrytis cinerea）和鏈格孢菌（Alternaria Nees）。Bell等也報(bào)道膠孢炭疽（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）會(huì)引起藍(lán)莓炭疽病。
Jiang Xiaoqian和劉春燕等也在四川產(chǎn)區(qū)藍(lán)莓果實(shí)上分離到了青霉、鐮刀菌和黑曲霉，其分別能夠引起藍(lán)莓發(fā)生青霉病、果腐病和黑霉病，其中黑曲霉的致病性最強(qiáng)。葛達(dá)娥等從江蘇產(chǎn)區(qū)生產(chǎn)的藍(lán)莓果實(shí)上分離得到稻黑孢霉、青霉屬、枝孢屬和鏈格孢屬真菌致病菌，致病性實(shí)驗(yàn)確定鏈格孢霉為主要病原菌。因此，不同地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)優(yōu)勢(shì)致病菌存在差異，分離特定地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)的優(yōu)勢(shì)致病菌對(duì)于開發(fā)針對(duì)性的病害防治措施具有重要意義。
植物精油具有天然、低毒或無毒、廣譜抑菌和環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于新鮮果蔬的防腐保鮮。Yan Jia等發(fā)現(xiàn)山蒼子精油對(duì)竹子上的綠木霉、桔青霉以及黑曲霉有較好的抑菌活性。Ji Yaru等發(fā)現(xiàn)牛至精油和丁香精油對(duì)灰葡萄孢和鏈格孢菌的抑制效果較好，且60μL/L牛至精油能增強(qiáng)藍(lán)莓苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和過氧化物酶等抗病相關(guān)酶的活性，提高藍(lán)莓果實(shí)抗病性。Chen Chuying等發(fā)現(xiàn)丁香精油含量在0.4%以上時(shí)柑橘發(fā)病率與對(duì)照組相比降低了40%左右，且精油處理后柑橘果實(shí)中的H2O2含量和抗病相關(guān)酶活性升高，誘發(fā)了柑橘果實(shí)抗性，導(dǎo)致柑橘果實(shí)中丙二醛含量降低。
Wang Hanbo等研究了0、50、100μmol/L茉莉酸甲酯處理對(duì)藍(lán)莓果實(shí)中的防御物質(zhì)（如抗壞血酸、谷胱甘肽）、抗氧化酶（如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、抗壞血酸過氧化物酶）以及H2O2的影響，發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯提高了藍(lán)莓果實(shí)中防御物質(zhì)以及抗氧化酶的水平，且有效維持了藍(lán)莓的果實(shí)品質(zhì)。許晴晴也研究了100μmol/L香芹酚對(duì)藍(lán)莓果實(shí)抗病性酶活力以及果實(shí)品質(zhì)與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的影響，證實(shí)了精油處理可以延緩果實(shí)的衰老，及時(shí)清除藍(lán)莓果實(shí)體內(nèi)的自由基，提高藍(lán)莓果實(shí)抗病性，延長(zhǎng)其貨架期。盡管如此，植物精油在藍(lán)莓采后病害上的研究仍然非常有限，探究更多植物精油的作用效果對(duì)于制定藍(lán)莓果實(shí)病害防控措施具有一定指導(dǎo)意義。
基于此，本研究首先從自然發(fā)病的藍(lán)莓果實(shí)分離引起藍(lán)莓腐爛的優(yōu)勢(shì)致病菌，通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定其種類，并進(jìn)一步探究25種天然植物精油對(duì)藍(lán)莓致病菌的作用效果，以期為開發(fā)針對(duì)性的藍(lán)莓保鮮技術(shù)提供理論參考。
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