金黃色葡萄球菌PFGE分型、分布特征及藥敏情況（一）
近年來(lái)，隨著醫(yī)療相關(guān)的診療操作數(shù)量的上升，醫(yī)院獲得性感染已成為全球性問(wèn)題。腦血管病患者多數(shù)伴大腦功能缺陷，意識(shí)出現(xiàn)障礙，生活不能自理，吞咽功能、咳嗽反射受損，嘔吐物或食物返流可導(dǎo)致肺部感染，繼發(fā)肺部感染是腦血管病患者死亡的重要原因。金黃色葡萄球菌作為臨床常見(jiàn)的機(jī)會(huì)致病菌，是引起醫(yī)院獲得性肺炎的主要革蘭陽(yáng)性球菌。金黃色葡萄球菌可通過(guò)接觸、水和食物等在人與人、手與物、物與物之間傳播，特別是目前多重耐藥菌（MDRO）已經(jīng)成為世界性公共衛(wèi)生問(wèn)題的形勢(shì)下，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）在醫(yī)療環(huán)境中的傳播給患者帶來(lái)極大的感染風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)由于抗菌藥物選擇的局限性，也伴隨著治療困難和經(jīng)濟(jì)損失。
近期，海軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院腦血管外科病區(qū)在兩周內(nèi)相繼從2例患者的痰中檢出金黃色葡萄球菌，樣本采集均為住院48 h后，其中1例為氣管切開(kāi)術(shù)后，且此2例患者的床位相鄰。為了排除和預(yù)防環(huán)境因素引起的醫(yī)院感染，對(duì)該科室的醫(yī)務(wù)人員和環(huán)境進(jìn)行重點(diǎn)部位調(diào)查采樣，分析該病區(qū)環(huán)境中金黃色葡萄球菌分布特征。
1材料與方法
1.1樣本來(lái)源
對(duì)腦血管外科某日在崗工作的醫(yī)師、護(hù)士、工勤人員的咽部、手、工作服和病員床單元物體表面、工作站物體表面進(jìn)行采樣。
1.2方法
1.2.1采樣與培養(yǎng)使用浸濕生理鹽水或含中和劑的肉湯（青島海博生物技術(shù)有限公司）的棉拭子對(duì)醫(yī)護(hù)工勤人員的咽部、手、工作服、床單元物表、護(hù)士站物表進(jìn)行采樣。咽拭子采用四區(qū)劃線直接涂抹接種哥倫比亞血、麥康凱和巧克力瓊脂平板（上海科瑪嘉微生物技術(shù)有限公司），用于條件致病菌培養(yǎng)。其余類型樣本各采集兩份，第一份采用四區(qū)劃線直接涂抹接種哥倫比亞血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板，用于篩選條件致病菌。第二份將棉拭子手接觸部分折斷后放入含復(fù)方中和劑的無(wú)菌培養(yǎng)基中，2 h內(nèi)按照規(guī)范進(jìn)行接種，用于菌落計(jì)數(shù)，按相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)≤10 CFU/cm2為合格。兩種方法接種后的培養(yǎng)基放入（36±1）℃恒溫培養(yǎng)箱，24 h后對(duì)直接接種平板上的疑似致病菌進(jìn)行純分之后鑒定，48 h后對(duì)菌落計(jì)數(shù)法的平板進(jìn)行判讀。咽拭子采樣、分區(qū)劃線法接種和結(jié)果判讀參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第4版），手、物表采樣和菌落計(jì)數(shù)法結(jié)果判讀參照相應(yīng)規(guī)范。醫(yī)院醫(yī)用織物洗滌消毒技術(shù)規(guī)范WS/T508-2016僅對(duì)清洗后的工作服有微生物菌落數(shù)要求，對(duì)工作狀態(tài)下穿用的工作服未做要求和規(guī)范，故本研究對(duì)此類樣本僅計(jì)算菌落數(shù)，不做合格性判斷。
1.2.2菌株鑒定與藥敏試驗(yàn)采用微生物質(zhì)譜儀器（德國(guó)Bruker）對(duì)疑似致病菌進(jìn)行鑒定，對(duì)分離出的金黃色葡萄球菌采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行甲氧西林（頭孢西丁紙片法，英國(guó)OXOID）藥敏試驗(yàn)，參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）2020年M100文件判讀藥敏結(jié)果。質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 25923。
1.2.3脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）將待測(cè)金黃色葡萄球菌接種于平板，35℃培養(yǎng)過(guò)夜，用bioMérieux DENSIMAT比濁儀調(diào)整細(xì)菌懸液濃度，使?jié)岫葹?.0～6.5麥?zhǔn)蠞岫取＜尤?%Seakem Gold：1%SDS膠，混勻制備膠塊。使用含蛋白酶K的細(xì)胞裂解液（CLB）54℃消化3 h，純水清洗膠塊2次，TE（10 mmol/L Tris：1 mmol/L EDTA，pH值8.0）清洗膠塊4次，60 U SmaI（NEB公司）內(nèi)切酶25℃酶切4～5 h。在CHEF-DRⅢ（Bio-Rad Laboratories公司）電泳儀中進(jìn)行脈沖場(chǎng)電泳。電泳參數(shù)為4～40 s，19 h。電泳結(jié)束后，使用GelRed核酸染料染色，在讀膠儀中成像，PFGE圖像錄入BioNumerics軟件進(jìn)行聚類分析。分子量標(biāo)準(zhǔn)為H9812經(jīng)過(guò)XbaI酶切后的片段。
2結(jié)果
2.1樣本菌落數(shù)不合格情況和病原菌分布
2.1.1菌落數(shù)從醫(yī)務(wù)人員和物體表面環(huán)境中共采集菌落計(jì)數(shù)樣本88份，見(jiàn)表1。其中手12份，工作服12份，物體表面64份。手和床單元物表菌落數(shù)不合格率分別為66.7%（8/12）和13.7%（7/51），護(hù)士站物表菌落數(shù)不合格率為0。2位護(hù)工手的菌落數(shù)均較高，其中1位高達(dá)100.0 CFU/cm2，3位醫(yī)師手的菌落數(shù)分別為12.0、40.0、56.7 CFU/cm2，護(hù)士手的菌落數(shù)范圍為0～50.0 CFU/cm2，床單元和護(hù)士站物體表面菌落數(shù)范圍分別為0～30.0 CFU/cm2和0～9.6 CFU/cm2，工作服菌落數(shù)為0.8～29.4 CFU/cm2。床單元物表菌落數(shù)不合格的7份分別為：監(jiān)護(hù)儀按鈕（1份）、氧飽和度探頭（3份）、床欄（2份）、床頭柜臺(tái)面（1份）。護(hù)士站物表菌落數(shù)最高的為ICU護(hù)士站桌面，為9.6 CFU/cm2。
表1腦血管外科病區(qū)環(huán)境樣本的微生物菌落數(shù)不合格情況
2.1.2病原菌分布金黃色葡萄球菌在醫(yī)務(wù)人員和工勤人員的咽拭子、手、工作服、地面、患者床單元物表均有檢出，總檢出率為17.8%（18/101），見(jiàn)表2。醫(yī)務(wù)人員咽拭子、手和工作服檢出率分別為7.7%（1/13）、25.0%（3/12）和33.3%（4/12），護(hù)士站和床單元物表檢出率分別為38.5%（5/13）和9.8%（5/51），具體分布為1名護(hù)士咽拭子、1名醫(yī)師手、2名護(hù)士手、3名護(hù)士工作服、1名護(hù)工工作服、護(hù)士站物體表面5處和床單元物體表面5處。此外，皮氏不動(dòng)桿菌在氧飽和度探頭、呼吸機(jī)按鈕、地面和墻面多處中檢出，產(chǎn)氣克雷伯菌在隔簾上檢出，肺炎克雷伯菌、日勾維腸桿菌、停乳鏈球菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、解甘露醇羅爾斯頓菌在醫(yī)務(wù)人員的咽拭子中檢出。
表2腦血管外科病區(qū)環(huán)境樣本的病原菌檢出情況
2.2金黃色葡萄球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果
從不同來(lái)源分離出的21株金黃色葡萄球菌對(duì)甲氧西林的藥物敏感性見(jiàn)圖1。其中，分離于護(hù)士站地面的菌株為MRSA，其余從環(huán)境中分離出的菌株均為甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）。從該科室患者P1和P2痰中分離出的3株金黃色葡萄球菌（S7、S8和S9）均為MRSA。
圖1金黃色葡萄球菌PFGE聚類分析圖以及菌株藥敏情況
2.3金黃色葡萄球菌PFGE分型
PFGE結(jié)果顯示，21株金黃色葡萄球菌分為13個(gè)PT型：患者痰包含2個(gè)型別（PT05和PT06），咽拭子包含1個(gè)型別（PT02），手包含3個(gè)型別（PT04、PT09和PT12），工作服包含3個(gè)型別（PT01、PT04和PT11），見(jiàn)圖1。ICU護(hù)士站櫥柜把手和護(hù)工HW1工作服上檢出的金黃色葡萄球菌型別一致（PT01），且與護(hù)士N2咽拭子檢出的金黃色葡萄球菌型別（PT02）相似度高（89.7%）。護(hù)士N3的手和工作服上檢出的金黃色葡萄球菌型別一致（PT04），且與患者P1痰中兩次時(shí)間點(diǎn)檢出的金黃色葡萄球菌（S7和S8）型別（PT05）相似度高，為91.1%。患者P2痰中檢出金黃色葡萄球菌S9型別（PT06）與病區(qū)護(hù)士站地面金黃色葡萄球菌型別（PT07）高度相似（92.9%）。但2例患者檢出的菌株型別（PT05和PT06）差距較大。患者P4床頭柜和其床旁椅子上檢出的金黃色葡萄球菌型別一致（PT08）。ICU護(hù)士站鍵盤和文具與患者P3使用的監(jiān)護(hù)儀按鈕上檢出的金黃色葡萄球菌型別一致（PT10）。患者P5床頭柜臺(tái)面、護(hù)士N5工作服、ICU護(hù)士N1工作服檢出的金黃色葡萄球菌型別一致（PT11）。
相關(guān)新聞推薦
1、微生物生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)炭疽芽孢桿菌生長(zhǎng)及抗菌藥敏感性
2、黃豆發(fā)酵工藝：微生物與風(fēng)味物質(zhì)生成的相關(guān)性分析
3、新形式治療方法：等離子體對(duì)白假絲酵母菌的抑制、殺滅作用