絲狀真菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定方法及其測(cè)定裝置
微生物生長(zhǎng)時(shí)期一般分為：遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期。一般常規(guī)的細(xì)菌等微生物，可以直接比濁法來(lái)測(cè)定其生長(zhǎng)曲線。一般具有菌絲的真菌，也有很多測(cè)定方法，如離心稱重法、菌絲濃度法、菌絲長(zhǎng)度測(cè)量法。離心稱重法由于每隔一段時(shí)間就需要取出全部離心稱量，耗時(shí)長(zhǎng)，且稱重后，培養(yǎng)物就沒(méi)有了，測(cè)定生長(zhǎng)曲線的時(shí)候，若使用離心稱重法，便在初始的時(shí)候，就需要配制很多數(shù)量的培養(yǎng)基，同時(shí)接種，且離心稱重法有可能因?yàn)槊科總€(gè)體的不同，會(huì)有誤差；菌絲濃度法是通過(guò)測(cè)定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來(lái)反映微生物的生長(zhǎng)狀況，但由于該方法相對(duì)粗放簡(jiǎn)便，離心沉淀物中夾雜有一些固體營(yíng)養(yǎng)物，從而易導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差；菌絲長(zhǎng)度測(cè)量法則是在培養(yǎng)基上測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)菌絲生長(zhǎng)的長(zhǎng)度，或是利用一只一端開(kāi)口并帶有刻度的細(xì)玻璃管，到入合適的培養(yǎng)基，臥放，在開(kāi)口的一端接種微生物，一段時(shí)間后記錄其菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度，借此衡量絲狀微生物的生長(zhǎng)，該方法操作相對(duì)復(fù)雜，且對(duì)無(wú)菌環(huán)境要求高。
本文提供一種絲狀真菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定方法及其測(cè)定裝置，具有操作簡(jiǎn)便快捷，對(duì)菌體生長(zhǎng)影響小、準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)。
一種絲狀真菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定裝置，包括：
培養(yǎng)裝置1、測(cè)量筒4及承載架6；
所述培養(yǎng)裝置1上設(shè)有培養(yǎng)裝置液位刻度線2，內(nèi)設(shè)有第一液體擋板7及第二液體擋板8，頂部開(kāi)有瓶口3；
所述測(cè)量筒4上設(shè)有測(cè)量筒液位刻度線5及實(shí)心管401；
所述承載架6通過(guò)嵌套的方式固定于實(shí)心管401上。
此技術(shù)方案特征在于，所述測(cè)定裝置成分為玻璃、高分子材料或具有可視刻度窗口便于測(cè)定的不銹鋼，所述測(cè)定裝置中的測(cè)量筒(4)為圓柱形的測(cè)量筒或六棱柱形的測(cè)量筒。
一種利用上述測(cè)定裝置測(cè)定絲狀真菌生長(zhǎng)曲線的方法，包括以下步驟：
W1.配制一定體積的液體培養(yǎng)基，并記錄此時(shí)體積為V培；
W2.使培養(yǎng)裝置1的底面與水平面平行，將液體培養(yǎng)基從瓶口3處倒入培養(yǎng)裝置1中，并用透氣硅膠塞塞好或紗布加牛皮紙包好瓶口3，然后進(jìn)行濕熱滅菌；
W3.濕熱滅菌結(jié)束后，取出裝置并使其自然冷卻至室溫后，在超凈工作臺(tái)中接入菌種，菌種密度為>109CFU/g，此時(shí)得到含有菌種的液體培養(yǎng)基；
W4.將裝置翻轉(zhuǎn)使承載架6的底面與水平面平行，使含有菌種的液體培養(yǎng)基從培養(yǎng)裝置1中流入測(cè)量筒4中，待自然沉降10～20min，此時(shí)含有菌種的液體培養(yǎng)基出現(xiàn)明顯分層，上層為液體培養(yǎng)基層下層為菌種層，讀取此時(shí)菌種層的體積，記錄為V0；
W5.記錄完畢后，拆下承載架6，把裝置正放使培養(yǎng)裝置1的底面與水平面平行，然后放入搖床中培養(yǎng)；
W6.每培養(yǎng)一段時(shí)間取出測(cè)量，將裝置翻轉(zhuǎn)使承載架6的底面與水平面平行，使含有菌種的液體培養(yǎng)基從培養(yǎng)裝置1中流入測(cè)量筒4中，待自然沉降2～4min，此時(shí)含有菌種的液體培養(yǎng)基出現(xiàn)明顯分層，上層為液體培養(yǎng)基層下層為菌種層，讀取此時(shí)菌種層的體積，記錄為Vt。
如圖中所示，V/mL曲線為利用本裝置測(cè)量的生長(zhǎng)曲線，G/g曲線為利用常規(guī)的離心稱重法測(cè)的生長(zhǎng)曲線。從V/mL曲線中，可以看出約在12h之前為延滯期，12h后米曲霉開(kāi)始較快速生長(zhǎng)，12～32小時(shí)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在32h左右進(jìn)入穩(wěn)定期。這一結(jié)論基本也可以從G/g曲線中得出，從而驗(yàn)證本裝置測(cè)量方法的有效性以及科學(xué)性。
所提供的測(cè)定方法及測(cè)定裝置只需要配置幾瓶用于平行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果的培養(yǎng)基，并接種培養(yǎng)即可，具有操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，經(jīng)濟(jì)性好，且測(cè)量的數(shù)據(jù)都來(lái)源于同一瓶的數(shù)據(jù)，準(zhǔn)確性更強(qiáng)的效果，可以在極短的時(shí)間內(nèi)給科研人員相應(yīng)的絲狀真菌生長(zhǎng)狀態(tài)指導(dǎo)。
測(cè)定方法中所提供的助劑，可以加快絲狀真菌在測(cè)量筒4中的沉降速度。助劑中的乙酰化酶和乙酰輔酶A對(duì)絲狀真菌的細(xì)胞壁進(jìn)行乙酰化修飾，乙酰化酶通過(guò)將乙酰輔酶A的乙酰基轉(zhuǎn)移到細(xì)胞壁表面上的氨基酸殘基上，提高其菌絲的疏水性，從而使得裝置從搖床中取出測(cè)定絲狀真菌生長(zhǎng)情況時(shí)，由于脫離了搖床的振動(dòng)，其菌絲的疏水性可使其快速沉降于測(cè)量筒4的底部，大大減少了測(cè)定的耗時(shí)，一定程度上減少了取出測(cè)試時(shí)對(duì)絲狀真菌生長(zhǎng)的影響，確保其生長(zhǎng)的連續(xù)性；另助劑中的聚乙烯醇可以一定程度上減少絲狀真菌菌絲的粘附性，使得在搖床中振動(dòng)培養(yǎng)時(shí)絲狀真菌在液體培養(yǎng)基中分散得更均勻，減少了菌絲間因粘附成團(tuán)從而影響其正常生長(zhǎng)。
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