野生黑木耳N56菌株分離純化、菌絲生長速率實(shí)驗(yàn)（二）
2結(jié)果和分析
2.1菌株篩選
2.1.1初篩
將61株菌株在PDA斜面試管和PDA培養(yǎng)皿上的生長情況于對(duì)照菌株黑微29號(hào)的生長情況進(jìn)行比較，結(jié)果有35株菌株比對(duì)照菌株的生長速度慢，菌絲不夠濃密，長勢(shì)不健壯而被淘汰。拮抗試驗(yàn)的目的是檢查各野生菌株上否是獨(dú)立的菌株，結(jié)果有8株菌株因無拮抗現(xiàn)象發(fā)生而被淘汰。對(duì)入選的18個(gè)初篩菌株的生長情況和培養(yǎng)特征進(jìn)行觀察比較，結(jié)果見表1。
從表1可以看出，各菌株在菌落形態(tài)或菌絲蔓延速度上的特征均不相同。將各菌株的各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照菌株進(jìn)行比較,得出的結(jié)果是N4、N7、N11、N18、N38、N56等6株菌株為比較理想的菌株。
2.1.2復(fù)篩
為了比較初篩菌株的培養(yǎng)特征、纖維素酶活力和栽培試驗(yàn)對(duì)6個(gè)初篩菌株進(jìn)行了復(fù)篩，結(jié)果如下。
2.1.2.1纖維素酶活力的測(cè)定結(jié)果注:T為用面積生長指數(shù),指在確定的時(shí)段內(nèi),菌絲在平板上擴(kuò)展的程度及其與參試菌株的比值;ΔS為菌株生長到12 d和14 d菌落面積之差;t為生長指數(shù),即ΔS/ΔS表示相鄰時(shí)段凈生長面積與參試菌株的比值。菌絲密度類型的定義方法是求出全部參加觀察的菌絲密度，求出其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差Sd。凡菌絲密度≥Sd＋平均值者定為“密”＜Sd＋平均值者定為“稀”，介于二者間定為“中等”。
表1菌落的形態(tài)特征
復(fù)篩篩選出的6株菌株的纖維素酶活力，見表2。
表2 6株菌株的纖維素酶活力值
由表2證實(shí),菌株的纖維素酶的活力與產(chǎn)量呈正相關(guān)。其中N56號(hào)菌株纖維素酶活力居參試菌株之首。
2.1.2.2產(chǎn)量和生物學(xué)效率
6株菌株的產(chǎn)量和生物學(xué)效率見表3。
表3 6株菌株的產(chǎn)量和生物學(xué)效率
生物學(xué)效率表達(dá)菌種對(duì)培養(yǎng)基質(zhì)轉(zhuǎn)化利用能力。復(fù)篩試驗(yàn)再次證明，N56號(hào)菌株產(chǎn)量（42.2 g/袋）處于首位，生物學(xué)效率達(dá)到93.7%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于市場(chǎng)上普遍使用的黑微29號(hào)菌株的產(chǎn)量。
2.1.2.3多糖含量
將由6株菌和對(duì)照菌株栽培的樣品經(jīng)Seveg法除掉雜質(zhì)，乙醇沉淀后用蒽酮比色法測(cè)定多糖含量[8]，結(jié)果如表4。
表4 7株菌株和對(duì)照菌株的多糖含量
由表4可以得出，供試野生黑木耳菌株擔(dān)子果中多糖的平均含量是1659.2 mg/100 g，高于與對(duì)照菌株擔(dān)子菌中中多糖含量（1543.4mg/100 g）。
2.2 N56號(hào)菌株的生長特性[10]
2.2.1形態(tài)特征
采用平板觀察法。平皿上的菌落生長12 d后，菌絲呈放射狀延伸，菌絲密度較大，白色無色素，各平行培養(yǎng)的N56號(hào)菌株表現(xiàn)均相同。黑微29號(hào)稍有色素，較密，邊緣菌絲放射狀延伸。N56號(hào)與黑微29菌株的菌落形狀如圖1所示。
2.2.2生長速度
2種菌株在PDA培養(yǎng)皿上菌落擴(kuò)展速度如表5所示。
圖1 N56號(hào)與黑微29菌株的菌落形態(tài)
表5 N56與黑微29號(hào)菌株的菌落擴(kuò)展速度
由表5可以得出，N56號(hào)菌株在PDA培養(yǎng)皿上菌落擴(kuò)展速度與黑微29號(hào)菌株相比，初期菌落擴(kuò)展速度較慢，說明生長較慢，14 d后，在PDA培養(yǎng)皿上菌落擴(kuò)展速度迅速加快，達(dá)到5.4 mm/d，說明生長急速加速，超過了對(duì)照株（5.0 mm/d）在PDA培養(yǎng)皿上菌落擴(kuò)展速度。
2.2.3 pH與N56號(hào)菌株菌絲生長
pH對(duì)N56號(hào)菌株菌絲生長的影響，見圖2。
圖2 pH對(duì)N56號(hào)菌株菌絲生長的影響
圖2直觀地說明，N56號(hào)菌株菌絲在pH高于4.0時(shí)方能萌發(fā)，隨著pH的升高，菌絲生長加速。在pH＝6.0時(shí)，菌絲生長速度最快，超過這一pH，菌絲生長速度大為減緩。由此可知，pH6.0～7.0利于菌絲生長，N56號(hào)黑木耳菌絲的適宜PH值為6.0左右。
2.2.4溫度與N56號(hào)菌株菌絲生長
溫度對(duì)N56號(hào)菌株菌絲生長的影響，見圖3。
圖3溫度與N56號(hào)菌株菌絲生長關(guān)系
由圖3可知：N56號(hào)菌株菌絲在溫度高于7℃時(shí)方能萌發(fā)，隨著溫度的升高，菌絲生長加速。在25℃～26℃時(shí)，菌絲生長最快，超過這一溫度，菌絲生長大為減緩。故N56號(hào)黑木耳菌絲的適宜生長溫度為25℃。
3結(jié)論
在黑龍江東部山區(qū)采集分離到的61株野生黑木耳菌種按常規(guī)的育種程序，篩選出一株高產(chǎn)菌株，編號(hào)為N56號(hào)。該菌株的纖維素酶活力為4633 U/g，生物學(xué)效率93.7，產(chǎn)量（42±5）g/袋，菌絲生長速度5.4 mm/d，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照株黑微29號(hào)。N56號(hào)菌株適宜生長條件為溫度25℃、pH6.0。
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