廣西牛肺炎支原體病原的分離和鑒定、藥敏實驗分析（下）
2.3病原生化性狀和細菌L型測定
病原細菌L型測定無其他細菌形態出現。生化試驗結果表明，只能發酵乳糖，不能水解精氨酸，對葡萄糖、木糖、覃糖、七葉苷、蔗糖、尿素和甘露醇均不能分解利用。
2.4PCR鑒定
利用牛支原體特異性基因op?p D/F F1和F2引物可以從樣品中擴增出448 bp的片段，與預期相符，而應用牛傳染性胸膜肺炎特異性引物擴增樣品則為陰性（圖3）。
圖3病原的PCR鑒定結果
2.5opp D/F基因序列測定與比較結果
通過對病原的opp D/F基因的序列分析表明，病原（命名為Gxmboppdf）與國內首次分離的牛支原體HB0801及Hubei-1株同源性為99.3%（圖4）。
2.6藥敏試驗結果
經48 h培養后觀察，病原對氧氟沙星、環丙沙星、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、左氟沙星、恩諾沙星、林霉素、氯霉素、新霉素、強力霉素、諾氟少星、大觀霉素、四環素高敏；對丁胺卡那霉素中敏；對阿奇霉素、紅霉素低敏；對頭孢拉定、青霉素、頭孢曲松、利福平、頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢唑啉、氨芐西林、羅紅霉素、多粘菌素、復方新諾明耐藥。
2.7其他細菌的分離
無菌取病牛肝、腎、肺、淋巴結分別接種TSA瓊脂培養基和兔血營養瓊脂培養基，37℃培養48 h后未見有菌生長。
圖4廣西牛支原體同源性比較及進化樹分析
3、討論
根據發病經過、臨床癥狀、病理變化、病原培養特性、生化試驗、PCR鑒定，確診該病為牛支原體（Mycoplasma bovis）引起的犢牛肺炎，即傳染性牛支原體肺炎。自美國人Hale（1961）首次從患乳腺炎的牛奶中分離到該病原，目前已證實牛支原體可引發牛肺炎、乳腺炎，此外，還可導致角膜結膜炎、耳炎、關節炎、生殖道炎癥、流產和不孕等多種疾病，已在世界范圍內存在。該病在歐洲最為嚴重，每年約有25%——33%的犢牛肺炎由牛支原體引起，經濟損失達1.44億——1.92億歐元。在美國每年由牛支原體引起的牛呼吸系統疾病和乳腺疾病所造成的經濟損失也高達1.40億美元，感染率高達70%.2008年，我國部分地區肉牛暴發了以壞死性肺炎為主要特征的犢牛肺炎疫情，辛九慶、石磊、冉智光等證實該疫情是由牛支原體引起的“傳染性牛支原體肺炎”，疫情波及湖北、河南、山東、東北三省等多個省市自治區，幾乎涵蓋了中國養牛的主要產區，牛發病率高達50%——100%，病死率達10%——50%，給我國的養牛業造成巨大的經濟損失。廣西是飼養水牛最多的省（區），存欄437萬頭，奶牛存欄8.77萬頭，最近幾年肉牛產業也蓬勃興起，引種和流通增多，以肺炎癥狀為主的病例時有發生，不易治療，給養殖戶造成很大的經濟損失。
在臨床診斷中，牛支原體引起的臨床癥狀和病理剖檢變化與牛傳染性胸膜肺炎類似，造成診斷上的困難，因此病原分離與鑒定成為最終確診的重要依據。本實驗室在收集到牛肺臟病料時進行了病原的分離和鑒定，結果分離到1株牛支原體。此前，廣西未見有牛支原體病的報道，本文首次報道了廣西從外地引進的肉牛有該病的存在，但本病在廣西的流行情況以及對廣西養牛業造成危害程度有待進一步調查。
目前尚無商品化的疫苗對牛支原體病進行預防，臨床上宜采取綜合性的防治措施。一是加強對牛群的引種檢疫，不從疫區引種，引種前應做好牛支原體病、結核、布魯菌病、泰勒蟲病等檢測，防止引進病牛或帶菌牛。牛群引回后應隔離檢疫，確保牛群健康并做必要的預防接種和驅蟲后方可混群；二是加強對牛群的飼養管理和消毒工作；三是對發病牛隔離治療，早發現，早診斷，早治療是有效控制本病的原則。在用藥上宜全群（和病牛接觸的牛群）用藥，療程要夠，藥量要足。藥敏試驗的結果表明，四環素類、喹諾酮類和泰樂菌素類對牛支原體敏感，但要注意經常變換藥物，以免耐藥性的產生而使治療效果不理想。
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