泰樂菌素降解菌生長曲線測定：活菌計(jì)數(shù)法、比濁法、電導(dǎo)率法哪個(gè)更準(zhǔn)確
本文以早期分離篩選的泰樂菌素降解菌——無丙二酸檸檬酸桿菌（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒａｍａｌｏｎａｔｉｃｕｓ）為材料，繪制該菌生長曲線，為研究該菌的形態(tài)學(xué)特征、適應(yīng)性及泰樂菌素降解機(jī)理提供其生長量參數(shù)。
泰樂菌素降解菌生長曲線的測定步驟
取４８ｈ培養(yǎng)后的泰樂菌素降解菌種子液，將種子液按１０％的接種量培養(yǎng)，分別在８～７２ｈ中，間隔８ｈ取樣。用活菌計(jì)數(shù)法測量培養(yǎng)基中細(xì)菌濃度，同時(shí)以１２１℃，滅菌２０ｍｉｎ的ＹＰＤ培養(yǎng)基為對(duì)照，采用比濁法測定菌液濃度，重復(fù)３次，計(jì)算平均值；分別在８～７２ｈ間，每間隔４ｈ取菌液１ｍＬ，加入裝有３０ｍＬ去離子水的試管中，同上條件超聲處理，取細(xì)胞破碎后的菌液５．０ｍＬ，用ＤＤ－１２Ａ型電導(dǎo)率儀測定電導(dǎo)率值，每個(gè)樣品測定３次，計(jì)算平均值。繪制泰樂菌素降解菌培養(yǎng)時(shí)間與Ｉｎ（ｃｆｕ／ｍＬ）以及ＯＤ５００ｎｍ和電導(dǎo)率值的生長曲線。
泰樂菌素降解菌的生長曲線
分別采用活菌稀釋計(jì)數(shù)法、電導(dǎo)率法和比濁法對(duì)泰樂菌素降解菌的生長曲線進(jìn)行測定，結(jié)果如圖１，圖２所示。活菌稀釋計(jì)數(shù)法測定的降解菌生長曲線符合細(xì)菌生長的各個(gè)階段：０～８ｈ為降解菌生長的延遲期，８～２４ｈ為對(duì)數(shù)生長期，２４～５６ｈ為穩(wěn)定期，５６～７２ｈ為衰亡期。電導(dǎo)率法測定的生長曲線也有明顯的延遲期、對(duì)數(shù)生長期和穩(wěn)定期，且延遲期和對(duì)數(shù)生長期的時(shí)間范圍和活菌稀釋計(jì)數(shù)法相似，但此法所測到的穩(wěn)定期為２４～７２ｈ，無衰亡期。而分光光度法的生長曲線始終保持上升狀態(tài)，無明顯的延遲期、對(duì)數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰亡期。
由于菌體細(xì)胞的性狀特征和培養(yǎng)基組分影響，可采用電導(dǎo)率法來替代比濁法測定細(xì)菌的生長曲線和生長量。因?yàn)樵诰w細(xì)胞含量較大時(shí)，在液體培養(yǎng)基中容易下沉，采用比濁法會(huì)存在一定誤差，另外，培養(yǎng)基的成分也會(huì)干擾細(xì)菌細(xì)胞的滲透情況，進(jìn)而影響菌液的折射率以及渾濁程度。
綜上所述，采用電導(dǎo)率法能夠準(zhǔn)確快速地測定泰樂菌素降解菌的生長量，該方法的建立將為篩選泰樂菌素藥渣中的降解菌株提供較好的評(píng)價(jià)方法。
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