紅參對鼠李糖乳桿菌和保加利亞乳桿菌體外生長的影響（上）
越來越多的研究表明，腸道微生物群快速、高精確地對飲食、抗生素、環境、精神壓力等外界刺激產生反應，與人體肥胖、精神類、代謝類和免疫類等疾病息息相關。食用益生菌和益生元能增強腸道中有益的共生群體，達到增強人體免疫力的效果，然而益生菌進入消化道，需要克服胃酸消化、定植力以及存活率等棘手問題。比較而言，益生元是不可消化的膳食多糖，當外部供應時可以促進遺傳性腸道微生物或益生菌的生長，因此對益生元的研究非常有意義。Ramirez-Farias等研究發現，菊粉的攝入刺激了青春雙歧桿菌的生長；Cani等發現，向HFD小鼠喂養低聚果糖導致雙歧桿菌數量大大增加，從而減少LPS產生的炎癥標志物；Joossens等報道17名志愿者攝入富含低聚果糖的菊粉，導致雙歧桿菌和青春雙歧桿菌物種的顯著增加。益生元的種類有很多，主要包括低聚糖類、多元醇、蛋白質水解物以及天然植物提取物等。目前研究和應用較多的是功能性低聚糖類，如低聚木糖和低聚果糖。植物提取物作為天然食品的來源具有更好的發展優勢和前景，符合人們對健康飲食潮流的追求。
人參是天然植物資源的一種，其藥用歷史已有4 000余年。根據《中華人民共和國食品安全法》和《新資源食品管理方法》的規定，2012年8月29日批準人參（人工種植）為新資源食品，由此人參作為藥食兼用植物進入日常生活中。紅參是人參蒸制干燥后的熟制品，富含人參皂苷、多糖、多肽、微量元素和氨基酸等多種營養物質，具有補氣、補血，復脈固脫、安神定魂和止驚悸等功效，又因其具有提高免疫力，抗腫瘤、抗輻射以及抗衰老等生理功能而被廣泛應用于醫藥和化妝品領域等。目前對紅參多糖的研究不多，主要集中在提取、純化和鑒定以及藥理與臨床應用等方面，其作為益生元的益生功能方面的研究幾乎沒有。僅本實驗室丁碩曾研究紅參等9種健脾胃天然植物對益生菌體外生長的影響。對紅參作為益生元研究的缺乏，限制了紅參的應用。有必要研究紅參對乳酸菌的體外增菌效果。
本試驗中以紅參為主要材料，以典型益生元低聚木糖和低聚果糖為參照，研究紅參對典型益生菌鼠李糖乳桿菌AS 1.2466T和傳統發酵菌保加利亞乳桿菌ATCC 11842兩株菌體外生長的影響，為紅參調節小鼠腸道菌群失調的體內試驗奠定基礎，也為發掘功能性食品與飼料奠定理論基礎。
1材料與方法
1.1材料
1.1.1菌種鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus）AS 1.2466T、德式乳桿菌保加利亞亞種（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）ATCC 11842，中國普通微生物菌種保藏中心。
1.1.2原材料紅參片，保定市普康大藥房提供；低聚果糖（FOS）和低聚木糖（XOS），保齡寶生物股份有限公司。
1.1.3發酵培養基
1）基礎培養基蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化鈉5 g，蒸餾水定容1 L，121℃，15 min滅菌。
2）菊芋汁基礎培養基菊芋→清洗稱重→加水（m料∶m水=1∶1）→加熱滅酶（100℃，5 min）→加水搗碎（補加適量80℃水）→過濾（100目濾布）→濾渣加水壓榨→加水定容100 mL→調配（糖度約10 Brix，pH 6.5～7.0）→加熱滅菌（121℃15 min）→冷卻，備用。
1.2試驗方法
1.2.1菌株生長曲線的繪制鼠李糖乳桿菌AS 1.2466T/保加利亞乳桿菌ATCC 11842經MRS液體培養基活化至109CFU/mL/108CFU/mL，以1%的接種量接種于基礎培養基/菊芋汁基礎培養基和液MRS中，37℃/42℃培養，每隔2 h取樣測定OD600值。以培養時間為橫坐標，OD600值為縱坐標，繪制兩株菌在不同培養基中的生長曲線。
1.2.2紅參多糖含量的測定
1）紅參提取液制備稱取紅參100 g，加水200 mL浸泡過夜，置于95℃水浴3 h，過濾，取濾渣加水200 mL繼續水浴，最后合并濾液濃縮至100 mL，按照藥液質量分數100 g紅參∶100 g水定義為100%原藥液。
2）紅參酸水解物制備模擬人體胃環境，將紅參提取液pH值調為3.0，37℃培養箱恒溫4 h，制成紅參酸水解物。
3）紅參多糖含量測定采用苯酚硫酸法測定紅參提取液多糖含量。分別取葡萄糖標準溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，補水至2 mL，搖勻。各加入1 mL的5%苯酚溶液，搖勻后迅速加入5.0 mL濃硫酸，混勻，靜置10 min后40℃水浴15 min，冷卻至室溫，測定OD490值。以OD490值為縱坐標，葡萄糖標準液濃度為縱坐標，繪制葡萄糖標準曲線。吸取紅參提取液1 mL，稀釋到合適倍數，以1 mL蒸餾水為空白對照，按照上述操作測定紅參提取液的多糖含量。
1.2.3 3種益生元對兩株乳酸菌體外生長的影響
向基礎培養基/菊芋汁基礎培養基中添加質量分數為0%，3.125%，6.25%，12.50%，25%和50%的紅參提取液及其酸水解物以及0%，0.4%，0.8%，1.2%，1.6%和2.0%的低聚果糖和低聚木糖。將活化好的鼠李糖乳桿菌AS 1.2466T/保加利亞乳桿菌ATCC 11842以1%接種量接種于基礎培養基/菊芋汁基礎培養基及其添加不同量益生元的基礎培養基/菊芋汁基礎培養基中，37℃/42℃恒溫培養至對數生長末期，取菌，測定其吸光度OD600和活菌數。根據OD600值和活菌數比較紅參提取液及其酸水解物和兩種低聚糖對鼠李糖乳桿菌AS 1.2466T和保加利亞乳桿菌ATCC 11842體外生長的作用。
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